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    Universal SYBR Green qPCR Mix

    Universal SYBR Green qPCR Mix

    型號:AZ00007   更新時間:2023-11-08

    簡要描述:

    Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR&#174; Green I 嵌合染料法專用qPCR 試劑,為2&#215; 預混液,包含除引物和DNA 樣品以外的所有qPCR 組分,可減少操作步驟,縮短加樣時間,降低污染幾率。

    品牌其他品牌供貨周期現貨
    應用領域醫療衛生,環保,食品,生物產業,制藥

    儲運條件

    長期保存請于-20℃避光保存,Mix 融解后可在4℃避光條件下穩定存放一個月,盡量避免反復凍融。

    產品組分

    Universal SYBR Green qPCR Mix 

    產品簡介

    Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法專用qPCR 試劑,為2× 預混液,包含除引物和DNA 樣品以外的所有qPCR 組分,可減少操作步驟,縮短加樣時間,降低污染幾率。其核心組分是經抗體修飾的熱啟動Taq DNA 聚合酶,配合精心優化的Buffer 體系以及PCR 反應促進因子,使產品具有特異性強、擴增效率高等特點,有效抑制非特異性擴增,可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量,獲得穩定可靠的qPCR 結果。預混液中含有通用校正染料,與絕大多數 qPCR 設備兼容,包括需要 ROX 校正的儀器,實驗過程中一般不需要額外添加校正染料。

    使用方法

    1. 使用注意

    ① 因Mix 中預混有染料,其保存或反應體系配制過程應避免強光照射;

    ② 使用前上下顛倒輕輕混勻Mix,請勿渦旋振蕩混勻,避免產生過多氣泡;

    ③ Mix 中含有Universal 校正染料,適用于所有機型,無需額外添加染料。

    2. 建議的qPCR 反應體系

    a. 通常推薦的引物終濃度為0.2 μM,反應效果不佳時可在0.1~1 μM 范圍內進行調整;

    b. 推薦模板加樣量為1~2 μl,如模板類型為未稀釋cDNA 原液,模板添加量不應超過總反應體系的10%。不同種類DNA 模板中含有的靶基因拷貝數目不同,必要時可進行梯度稀釋,以確定最佳的DNA 模板添加量。

    3. qPCR 反應程序(可根據機型適當調整)Universal SYBR Green qPCR Mix

    兩步法

    三步法

    a. 根據引物的Tm 值進行退火& 延伸(退火)溫度的設定;若擴增片段在200bp 以內,退火& 延伸(延伸)時間可以設置為15 sec;此外,退火& 延伸(延伸)時間的設置還需根據您使用的qPCR 儀所需要的最短數據采集時間自行調整;

    b. 不同qPCR 儀的熔解曲線采集程序有差別,一般可使用儀器默認的熔解曲線采集程序。

    4. 實驗優化

    若使用默認反應條件反應性能不佳時,則需要進行反應條件的優化,可以從引物濃度以及擴增程序兩個方面進行:

    ① 引物濃度調整

    當引物終濃度在0.1~1.0 μM 范圍之間變化時,引物濃度越低,擴增特異性越高,但擴增效率會有所下降。

    ② 擴增程序優化

    需提高擴增特異性,可使用兩步法程序或提高退火溫度;需提高擴增效率,可使用三步法程序或延長延伸時間。

    5. 引物設計原則

    ① 擴增產物長度建議控制在80~200 bp;

    ② 引物長度為18~25 bp;

    ③ 正向引物和反向引物的Tm 值相差不超過1℃為佳,Tm 值控制在58~62℃為佳;

    ④ 引物的GC 含量控制在40%~60% 之間;

    ⑤ 引物A、G、C、T 整體分布盡量要均勻,避開T/C 或者A/G 的連續結構(特別是3' 端);

    ⑥ 引物3' 端最后一個堿基最好為G 或者C;

    ⑦ 避開引物內部或者兩條引物之間的互補序列;

    ⑧ 使用NCBI BLAST 功能檢索確認引物的特異性。

    美國Azaood公司成立于2004年,是一家開發和生產用于生命科學研究、診斷和生物技術應用的高質量純化酶、蛋白質、核酸和細胞分離試劑盒、胎牛血清的lingdao者;Azood公司是通過了ISO9001認證的主要制造商,可以滿足從研究到大規模批量生物加工和OEM應用與要求的公司。




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